Анатоксин это основа многих вакцин: введение анатоксина у детей предотвращает заболеваемость инфекциями

Вакцины и анатоксины

Вакцины – это препараты из различных живых, инактивированных микроорганизмов или из их антигенных компонентов, которые используются для активной иммунизации людей с профилактическими и лечебными целями.

Живые вакцины изготавливают на основе аттенуированных (ослабленных) штаммов микроорганизмов. В настоящее время применяются живые вакцины: вакцина против туберкулеза (БЦЖ – BCG – Bacteria Calmett-Geren), чумы, сибирской язвы, туляремиии, бруцеллеза, полиомиелита, сыпного тифа, лихорадки Ку, эпидемического паротита, кори, желтой лихорадки, гриппа.

Инактивированные (неживые, убитые) корпускулярные (цельноклеточные или цельновирионные) вакцины изготавливают из типичных вирулентных штаммов микроорганизмов (бактерий или вирусов), реже из аттенуированных (ослабленных) штаммов путем химической (формалин, спирт, фенол) или физической (тепло, ультрафиолетовое облучение, радиация) инактивации. К этой группе относятся АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная с инактивированным коклюшным компонентом) вакцина, вакцины против клещевого энцефалита, холеры, гриппа, бешенства, гепатита А, полиомиелита, лептоспироза, синегнойной инфекции.

Химическиеубклеточные или субвирионные) вакцины представляют собой иммуногенные компоненты, извлеченные из микробной клетки с помощью физико-химических методов. К ним относятся менингококковая полисахаридная вакцина, вакцина брюшнотифозная из Vi-антигена, гриппозная тривалентная полимер-субъединичная вакцина с иммуномодулятором полиоксидонием (Гриппол). Нередко к этим вакцинам добавляют адъюванты – вещества, замедляющие всасывание антигена, в частности, гидроксид алюминия, алюминиево-калиевые квасцы, и др., стимулируя иммунный ответ.

Рекомбинантные вакцины создают с помощью генно-инженерной технологии, встраивая в геном вектора (дрожжи, кишечная палочка или вакцинный вирус, например, вирус осповакцины) ген чужеродного антигена (например, вируса гепатита В). После завершения культивирования вектора выделяют иммуногенный белок (HbsAG), подвергают его очистке и используют для профилактики гепатита В.

Анатоксины представляют собой бактериальные экзотоксины, обезвреженные формалином. Для обезвреживания к экзотоксину (фильтрату токсигенной культуры микроорганизма) добавляют 0,3— 0,4% формалина и выдерживают его при 37 0 С от 18 до 32 дней. При этом токсин утрачивает токсичность, но сохраняет его антигенность и иммуногенность. С целью снижения реактогенности анатоксины очищают от балластных веществ, концентрируют для уменьшения объема вводимого препарата, а затем сорбируют на гидроксиде алюминия с целью повышения иммуногенности. Для профилактики и лечения инфекций выпускаются стафилококковый, адсорбированный дифтерийный, адсорбированный дифтерийно-столбнячный, адсорбированный столбнячный, синегнойный, ботулинистический анатоксины.

Вакцины вводят различными путями – накожно (против оспы, туляремии), внутрикожно (БЦЖ), подкожно (против кишечных инфекций), энтерально (живая вакцина против полиомиелита), на слизистую оболочку носа (против гриппа), аэрогенно и комбинированными методами. В последнее время используют безыгольный внутрикожный метод. Живые вакцины вводят чаще однократно (против паротита, кори) или с последующей ревакцинацией (БЦЖ, против полиомиелита). Убитые вакцины и анатоксины вводят 2—3 раза, химические вакцины, как правило, однократно.

Вакцины применяют главным образом для профилактики инфекционных болезней. Для лечебных целей вакцины используют при хронических, вяло протекающих заболеваниях: фурункулез и другие стафилококковые инфекции, хроническая гонорея, бруцеллез и др. с целью стимуляции иммунной системы и десенсибилизацией организма.

В медицинской практике применяются следующие убитые лечебные вакцины: стафилококковая, бруцеллезная, гонококковая, стафило-протейно-синегнойная, герпетическая, синегнойная, протейная, анатоксины стафилококковый, синегнойной палочки.

Консервация и контроль качества вакцин.Убитые вакцины консервируют добавлением 0,25% фенола или мертиолата в соотношении 1:10 000. Живые вакцины стабилизируют путем лиофильной сушки (высушивание из замороженного состояния в условиях вакуума).

Вакцины хранят в запаянных ампулах или флаконах с этикетками, на которых указываются институт, изготовивший вакцину, название, серия вакцины, номер государственного контроля, срок годности. Срок годности устанавливают для каждого вида вакцины отдельно. Сухие вакцины (лиофилизированные) имеют больший срок годности, чем жидкие. Срок годности анатоксина 1—3 года. Хранят вакцины в сухом, защищенном от света месте при температуре 2—10 С. Перед употреблением сухую вакцину разбавляют изотоническим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой с соблюдением всех правил асептики. Количество жидкости, добавляемой к вакцине, должно быть указано в прилагаемом к вакцине наставлении.

Изменение нормаль­ного внешнего вида (цвета, степени мутности), наличие плесени, посторонних частиц, комочков, не разбивающихся при встряхивании, нарушение целостности ампулы или флакона, отсутствие этикетки свидетельствуют о непригодности вакцины к употреблению. Сухая вакцина, не образующая при растворении равномерной взвеси, также не пригодна к употреблению.

Все вакцины проходят государственный контроль. Убитые, химические вакцины и анатоксины проверяют на стерильность путем посева в асептических условиях 0,5 мл вакцины на МПБ, сусло-агар и среду Китта — Тароцци с последующим выращиванием посевов в термостате при 37 0 С в течение 5-8 суток. Отсутствие роста на питательных средах свидетельствует о стерильности вакцины.

Безвредность вакцин проверяют путем подкожного введения белым мышам 0,5 мл препарата. Выживание животных в течение 3 дней свидетельствует о безвредности вакцины.

Иммуногенность вакцин проверяют путем иммунизации чувствительных к данному заболеванию животных с последующим заражением их смертельной дозой соответствующей живой культуры. Процент выживших животных указывает на степень иммуногенности (60— 80—100% выживаемости).

Корпускулярная вакцина стандартизуется по содержанию опреде­ленного количества микробных клеток в 1 мл.

Активность ана­токсина определяют по его способности реагировать со специфической антитоксической сывороткой с помощью реакции флоккуляции. Сущность реакции заключается в том, что при смешивании токсина или анатоксина в определенных соотношениях с антитоксической сывороткой (антитоксином) образуется помутнение с выпадением рыхлого осадка. При строгом соответствии количества сыворотки и антигена реакция флоккуляции наступает раньше (так называемая начальная флоккуляция). Эта реакция применяется и для титрования противодифтерийной сыворотки.

Контроль качества противовирусных вакцин.Помимо общих для всех вакцин методов контроля, противовирусные вакцины должны контролироваться на отсутствие онкогенных свойств, обусловленных онкогенами и онкогенными вирусами, для чего заражают лабораторных животных и куриные эмбрионы. Контролируют также культуры тканей, применяющиеся для накопления вирусного материала. В качестве таких культур используют диплоидные клетки фибробластов, выращенных из тканей легких эмбриона человека. Клетки культивируют в специальных банках клеток, которые состоят из ряда ампул, содержащих клетки с установленной генеалогией, характеристиками роста и жизнеспособности, кариологическими показателями. У клеток должен отсутствовать признак прививаемости. Используют также клетки животных и птиц (кур, кроликов, обезьян), для чего животных разводят в закрытых колониях, свободных от присущих им патогенных агентов. Клетки, полученные от животных из таких колоний, не должны содержать вирусов-контаминантов. Обязательно контролируется качество питательных сред, используемых для получения культуры клеток. В этих средах должны отсутствовать бактерии, грибы, микоплазмы и посторонние вирусы. Для стерилизации сред рекомендуют использовать гамма-облучение.

Вакцинопрофилактика инфекционных болезней в России проводится в рамках плановых прививок и прививок по эпидемическим показаниям.

Плановые прививки проводятся во всех регионах страны в соответствии с календарем профилактических прививок (вакцинация против гепатита В, туберкулеза, полиомиелита, коклюша, дифтерии, столбняка, гемофильной инфекции, кори, эпидемического паротита, краснухи – табл. 14). Проводятся также плановые прививки населению на территориях, эндемичных по природно-очаговым и зоонозным инфекциям, группам с высоким риском заражения.

Прививки по экстренным эпидемическим показаниям предусмотрены в случае контакта восприимчивых (непривитых) лиц с источником инфекции. Сюда относятся прививки против гриппа, менингококковой инфекции, особо опасных инфекций, прививки в очагах инфекции, а также экстренная профилактика столбняка, бешенства. Группы населения, подлежащие вакцинации при возникновении неблагоприятной эпидемической обстановки, определяют органы управления здравоохранения субъектов России.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Виды препаратов, применяемых для иммунопрофилактики – Характеристика вакцин, анатоксинов.

вкл. 17 Август 2012 .

Для проведения активной иммунизации используют различные виды биологических препаратов, главными из которых являются вакцины и анатоксины. В настоящее время для профилактики инфекционных заболеваний применяют следующие типы вакцин:

  1. Вакцины, включающие цельные убитые микроорганизмы, например, коклюшная, брюшнотифозная, холерная (бактерийные вакцины) или инактивированные вирусные вакцины — гриппозная, полиомиелитная вакцина Солка.
  2. Анатоксины, содержащие инактивированный токсин вырабатываемый микробом-возбудителем, например, дифтерийный, столбнячный анатоксины.
  3. Вакцины, состоящие из живых с ослабленной вирулентностью (аттенуированных) вирусов и микроорганизмов: коревая, паротитная, гриппозная полиомиелитная и другие, сибиреязвенная, чумная, туляремийная и другие.
  4. Вакцины, содержащие перекрестно реагирующие живые микроорганизмы, иммунологически связанные с возбудителем данного заболевания, но при введении человеку вызывающие ослабленную инфекцию, которая защищает от более тяжелой. К этому типу относится оспенная вакцина (из вируса коровьей оспы и вакцина БЦЖ из микроба, вызывающего туберкулез крупного рогатого скота), бруцеллезная вакцина из штамма Br.abortus ВА-19.
  5. Химические вакцины, состоящие из фракций убитых микроорганизмов (брюшно-тифозно-паратифозных, пневмококков, менингококков).
  6. Вакцины нового поколения, генноинженерные, рекомбинантные, субъе-диничные, полипептидные, искусственные химически синтезированные и другие вакцины, созданные с использованием новейших достижений иммунологической науки, молекулярной биологии и биотехнологии. Благодаря этим методам уже получены вакцины для профилактики гепатита В, гриппа и др.
  7. Ассоциированные вакцины, в состав которых входит несколько моновакцин. Установлено, что при правильном подборе антигенов и их доз ассоциированные препараты могут обеспечить развитие иммунитета прививаемых лиц в отношении всех входящих в состав вакцины компонентов, и что при продуманном сочетании антигенов между ними не возникает конкуренции. По мнению экспертов ВОЗ (1976), при изготовлении ассоциированных вакцин целесообразно использовать не более 5-6 антигенов. Примером ассоциированных вакцин, использующихся в настоящее время для иммунизации детей, является широко применяемая во всем мире АКДС-вакцина, а также применяемые в ряде зарубежных стран паротитно-коревая и краснушно-паротитно-коревая вакцины. Особенно эффективны так называемые адсорбированные препараты, то есть осажденные на коллоидных субстратах (гидрат окиси алюминия, фосфат алюминия).

Главным компонентом вакцины является иммунизирующий антиген. В качестве такового выступают живые микроорганизмы и вирусы, убитые бактерии и вирусы, полисахаридный комплекс, обезвреженный токсин (анатоксин) или фрагмент возбудителя, кодирующий выработку специфических антител (рекомбинантные вакцины). В некоторых вакцинах в качестве антигена выступает единственный очищенный компонент возбудителя (например, столбнячный анатоксин), в других — полный комплекс в виде самого возбудителя (живые вирусы, убитые коклюшные бактерии). При введении таких вакцин характер иммунного ответа будет существенно различаться. В первом случае иммунитет будет исключительно антитоксическим, но не антимикробным, поэтому теоретически он может предупредить возникновение лишь тяжелых токсических форм болезни, но не локализованных проявлений, обусловленных самим возбудителем. С учетом этого можно объяснить тот факт, что у многих детей, вакцинированных против дифтерии, в крови у которых выявляется высокий уровень антитоксических антител, возникают локализованные формы болезни, и никогда не наблюдаются токсические формы. Вместе с тем, данное положение не исключает и того общеизвестного факта, что поголовная вакцинация против дифтерии приводит к полной ликвидации заболеваемости дифтерией, включая и легкие локализованные формы болезни.

Читайте также:  Гематома: что такое, почему образуются гематомы у новорожденного ребенка

Основой вакцины может быть сложная жидкость для культуры тканей, используемой для выращивания вируса. Несмотря на очистку, в таких вакцинах могут содержаться белки или другие компоненты, попавшие из среды или био¬логической системы, в которой получена вакцина (например, яичный белок в вирусных вакцинах, получаемых на куриных эмбрионах). Естественно, что у лиц с повышенной чувствительностью к этим компонентам возможны тяжелые аллергические реакции.

Консерванты, стабилизаторы и антибиотики необходимы для предотвращения бактериального роста или стабилизации иммунизирующего антигена. Например, в противодифтерийной вакцине в качестве консерванта используется соль ртути (мертиолят в разведении 1:10 ООО), в коревой вакцине могут быть следовые количества неомицина или канамицина. Их количество в современных вакцинах ничтожно мало и они существенно не влияют на качество вакцин. Вместе с тем, у лиц, чувствительных к одному из этих компонентов, возможны аллергические реакции. Поэтому всегда рекомендуется перед введением вакцины уточнить анамнез на предмет выявления гиперчувствительности к составляющим вводимой вакцины, что позволяет свести до минимума риск нежелательных реакций на их введение.

Вспомогательные средства при изготовлении вакцин применяют с целью повышения антигенных свойств иммунизирующего компонента и пролонгирования его действия. В качестве таковых используют соединения алюминия (например, для стабилизации дифтерийного и столбнячного анатоксина).

Структура ответа: Характеристика вакцин, анатоксинов.

Получение и применение анатоксинов в современной медицине

Опасность бактерий и других патогенных микроорганизмов заключается в том, что они способны выделять вредные для человека вещества под названием токсины. Они выступают причиной серьезных осложнений и гибели людей, зараженных инфекционными заболеваниями.

Вместе с тем изучение воздействия токсинов на организм дало толчок изобретению вакцин, которые позволили предотвратить эпидемии тяжелых инфекций и снизить смертность среди больных.

Посредством обработки этих веществ ученые получают токсоиды (анатоксины) — безопасные для здоровья соединения, использующиеся для изготовления лекарственных и профилактических препаратов. Что представляет собой анатоксин, и какую роль он играет в профилактике опасных инфекционных заболеваний?

Токсины и токсоиды в микробиологии

Токсины представляют собой вещества, которые способны угнетать функции жизнедеятельности, приводя к заболеваниям или гибели человека и животных. По своей химической природе они являются белками или полипептидами, и выделяются всевозможными живыми организмами.

Они обладают разным воздействием на организм — например, нейротоксины нарушают проводимость нервных импульсов между волокнами, приводя к дисфункции деятельность нервной системы, а цитотоксины уничтожая биологические мембраны клеток.

Важная особенность токсинов заключается в том, что при попадании в человеческий организм они вызывают образование антител, благодаря которым иммунная система может более быстро и эффективно обезвреживать чужеродных агентов. Принцип работы анатоксинов основывается на так называемой иммунной памяти человеческого организма.

Столкнувшись с определенными токсинами, иммунитет вырабатывает антитела для борьбы с ними, после чего сохраняет память об особенностях возбудителей заболеваний. Если они попадают в организм вторично, иммунная система реагирует быстрее, благодаря чему уничтожение чужеродных агентов и выздоровление ускоряется.

Как получают нативные анатоксины?

Ученые взяли в разработку методы получения анатоксинов еще в начале прошлого века — нужно было обработать токсичные соединения так, чтобы они не несли опасности для человека, но сохранили свои иммунобиологические свойства. Первые токсоиды были приготовлены из столбнячного токсина. Ученые установили, что под влиянием ультрафиолетовых лучей и формалина происходит его обезвреживание, а введение приготовленной из него сыворотки вызывает иммунитет к столбняку у животных.

Спустя 10 лет французский врач Рамон предложил способ обработки дифтерийного токсина, благодаря которому были приготовлены препараты для иммунизации людей. Методика, изобретенная Рамоном, используется для приготовления нативных анатоксинов — веществ, которые способствуют выработке антител против заболеваний, вызванных микроорганизмами, способными выделять токсины.

Бактерии помещают в питательную среду для накопления достаточного количества токсинов, после чего их фильтруют для удаления микробных тел, добавляют к полученному веществу формалин и подвергают нагреванию до полного исчезновения токсических свойств.

Чтобы снизить негативное воздействие соединений на организм, их обрабатывают с помощью разных физических и химических методов. После этого проводится адсорбирование полученных анатоксинов на адъювантах — веществах, которые усиливают иммунный ответ при введении препаратов в организм.

Препараты проверяются на безопасность и иммуногенность — их вводят лабораторным животным, после чего определяют количество анатоксинов, необходимых для защиты организма от нежелательных последствий при введении токсина.

Очищенные анатоксины не способны спровоцировать развитие инфекции или нанести организму серьезный вред, но могут выступать аллергенами и вызывать нежелательные реакции.

Применение токсоидов

Анатоксины используются для профилактики, реже для лечения токсикономических инфекционных заболеваний — то есть тех, которые вызваны бактериями, выделяющими токсины. К ним относится дифтерия, ботулизм, газовая гангрена, столбняк, некоторые инфекции, спровоцированные стафилококками.

В число наиболее распространенных препаратов входят:

Вакцины с содержанием анатоксинов делятся по количеству возбудителей, которые использовались для ее изготовления.

В состав каких вакцин не входят анатоксины?

В медицине используются разные профилактические препараты, каждый из которых имеет свои особенности:

  1. живые вакцины. Содержат ослабленные штаммы патогенных микроорганизмов, которые не вызывают заражение, но способствуют формированию иммунитета. Примеры: вакцины против туберкулеза, паротита, полиомиелита, бешенства, желтой лихорадки;
  2. инактивированные вакцины. Препараты готовят из инактивированных (убитых) бактерий — они отличаются максимальной безопасностью, но менее эффективны, чем живые вакцины. В их число входят профилактические препараты против гриппа, брюшного тифа, холеры;
  3. рекомбинантные вакцины. Инновационные препараты, которые отличаются высокой иммуногенностью (формируют стойкий иммунный ответ), практически не имеют противопоказаний и побочных эффектов. В России используется рекомбинантная вакцина против гепатита В.

Видео по теме

О вакцинах, сыворотках и анатоксинах в видео:

Изобретение методики получения анатоксинов сыграло важную роль в современной медицине и профилактике опасных инфекционных заболеваний. Препараты, которые изготавливаются на их основе, нельзя назвать идеальными, но ученые постоянно ищут способы совершенствования вакцин для создания максимально эффективных и безопасных препаратов.

АНАТОКСИНЫ

АНАТОКСИНЫ (anatoxina; греческий ana- — против + токсины) — бактериальные токсины, потерявшие в результате специальной обработки свои токсические, но сохранившие антигенные и иммуногенные свойства. Обычно токсины обезвреживают воздействием формалина и тепла (35—38°). Возбудители токсинемических инфекций — дифтерии, столбняка, газовой гангрены, ботулизма и другое — вырабатывают очень сильные экзотоксины, обладающие антигенными свойствами.

В 1909 году Левенштейн (Е. Löwenstein) случайно обнаружил быстрое падение токсичности столбнячного токсина под влиянием ультрафиолетовых лучей и формалина. В дальнейшем Эйслер (М. Eisler, 1912) и Левенштейн установили, что после добавления к столбнячному токсину 0,1—0,3% формалина и выдерживания при повышенной температуре происходит обезвреживание токсина. Введение такого токсина вызывает иммунитет у животных.

Десять лет спустя метод приготовления анатоксинов, пригодного для иммунизации людей, был разработан Районом (G. Ramon), о чем он сообщил 10 декабря 1923 года во французскую Академию наук. Рамон установил, что при воздействии формалина и тепла на дифтерийный токсин образуется обезвреженное соединение, обладающее антигенными и иммуногенными свойствами. Изучая реакцию флоккуляции дифтерийного токсина с антитоксином, он применял формалин как антисептик для сохранения токсина. Добавление формалина к токсину не препятствовало появлению феномена флоккуляции(см.), даже если этот токсин подвергался действию умеренного тепла в термостате. Не влияя на способность токсина флоккулировать, формалин резко снижал его токсические свойства, как и ряд других химических и физических свойств. Реакция флоккуляции токсинов с антитоксинами сыграла большую роль в разработке метода приготовления анатоксинов. С помощью этой реакции можно было легко контролировать изменение антигенных свойств анатоксинов в процессе обезвреживания токсинов формалином. До применения этой реакции было невозможно установить, сохраняет ли токсин антигенные свойства при потере токсигенных свойств.

Некоторые анатоксины могут быть аллергенами и вызывать у особо чувствительных субъектов общие и местные реакции, не имеющие отношения к специфической токсичности. Анатоксинам свойственна стабильность и необратимость: при длительном хранении при разных температурах они сохраняют свою безвредность и антигенные свойства. Антигенные свойства анатоксинов определяют по реакции связывания антитоксинов (см.), которая выражается в единицах связывания (ЕС), или по реакции флоккуляции с антитоксинами. Иммуногенные свойства анатоксинов определяют путем иммунизации животных (морские свинки, мыши) и выражают в иммунизирующих единицах (ИЕ), то есть в способности определенного количества анатоксинов защищать животных от введения соответствующих токсинов.

Принципы изготовления анатоксинов, разработанные Районом, легли в основу производства анатоксинов во многих странах мира. Это позволило начать массовую иммунизацию против дифтерии и столбняка, которая привела к резкому снижению заболеваемости этими инфекциями.

Процесс формалиновой детоксикацин рассматривают как необратимое нарушение структуры активного центра токсина за счет реакции с формалином входящих в состав токсина функциональных групп. На первых этапах детоксикация протекает очень быстро (как правило, на 1—4-е сутки инкубирования с формалином наблюдается падение токсичности на 80—90%), а достижение полной безвредности происходит только через 2—4 недели и более. Для получения безвредных и стабильных анатоксинов после обезвреживания должно пройти некоторое время для «созревания» анатоксинов. Обезвреживание бактериальных токсинов без нарушения их антигенных свойств происходит в нейтральной среде. Кислая среда препятствует взаимодействию формалина с аминогруппами токсина, замедляет или совсем прекращает процесс обезвреживания. Если формалинизацпя токсинов идет в щелочной среде, то обезвреживание токсина происходит быстро, но со значительной потерей его антигенных свойств. Оптимальное количество формалина для детоксикации всех токсинов рекомендуется от 0,3 до 0,8% ; в пределах этого количества к некоторым токсинам нужно добавлять формалин дробным методом, это способствует более быстрому обезвреживанию токсина без СИЛЬНОЕ потери антигенных свойств. Для обезвреживания токсина имеет большое значение температура, при которой содержится токсин. Повышение температуры ведет к более быстрой детоксикации всех токсинов со значительной потерей антигенных свойств. Попытки разработать ускоренный метод обезвреживания бактериальных токсинов путем добавления 1% и более формалина при t° 36—40° приводили к потере токсичности через 6—8 суток инкубации с резким снижением антигенных свойств. Увеличение количества формалина при детоксикации не оправдано еще и потому, что независимо от количества взятого формалина лишь определенная часть его вступает во взаимодействие с токсином. Количество связанного формалина зависит от состава среды, на которой приготовлен токсин, от содержания аминного азота, от химического состава токсина.

Читайте также:  Дегенерация у детей это не только пигментная дегенерация сетчатки глаза: печень и миокард

Для очистки анатоксинов от балластных белков применялось фракционное осаждение различными концентрациями сульфата аммония. В настоящее время этот метод используется лишь на отдельных этапах очистки и концентрации небольших объемов анатоксинов.

В зарубежных странах для очистки и концентрации дифтерийного и столбнячного анатоксина применяют метод ультрафильтрации через почкообразные фильтры, покрытые 8%парло-диновой оболочкой. Осадок после растворения в воде фракционируют сульфатом аммония при различных процентах насыщения. Очищенный дифтерийный анатоксин содержит 1800—2500 Lf на 1 мг общего азота (Lf — сокр. англ, limit of flocculation — порог флоккуляции).

В СССР для очистки и концентрации анатоксинов ботулинических, возбудителей газовой гангрены, дифтерийного и столбнячного анатоксинов применяют кислотное осаждение. Перед подкислением для усиления ионной силы раствора в анатоксины растворяют 10—30% хлорида натрия. Затем понижают рН анатоксинов до 3,5, добавляя НСl; выпавший осадок отделяют от жидкости и растворяют в 1/20 части изотонического раствора хлорида натрия от объема исходного анатоксина. Полученный концентрат анатоксинов подвергают дальнейшей очистке повторным осаждением ацетоном. При кислотном осаждении столбнячного и других анатоксинов в некоторых лабораториях для усиления ионной силы раствора анатоксина применяют гексаметофосфат. Бактериальные токсины и анатоксины можно очистить с помощью сорбции фосфатом алюминия, гидратом окиси алюминия, фосфатом кальция и другими неорганическими сорбентами с последующей элюцией (см.); кроме того, все более широкое применение находят методы ионообменной хроматографии и гель-фильтрации через сефадексы различных марок (см. Гель-фильтрация, Хроматография).

Для иммунизации против токсинемических инфекций применяются анатоксины, депонированные на гидрате окиси алюминия и фосфате алюминия; алюминиево-калиевые квасцы для депонирования применяются только в ветеринарной практике. Высокую пммуногенность депонированных анатоксинов объясняют адъювантным действием сорбента и замедленной резорбцией из депо антигена. В результате этого происходит длительное поступление небольших количеств анатоксинов в организм, что ведет к развитию напряженного иммунитета. Применение дифтерийного и столбнячного анатоксинов, сорбированных на гидроокиси алюминия, для массовой иммунизации людей в СССР дало резкое снижение заболеваемости дифтерией и столбняком.

Иммунизацию детей против дифтерии, столбняка и коклюша проводят ассоциированной вакциной, включающей сорбированные дифтерийный, столбнячный анатоксины и корпускулярную коклюшную вакцину.

В 1959 году был предложен концентрированный адсорбированный анаэробный полианатоксин, включающий столбнячный анатоксин, несколько типов гангренозного и ботулинического анатоксинов (всего 7 антигенов), обладающий хорошими иммуногенными свойствами. См. также Иммунизация, Токсины.

Библиография: Апанащенко Н. И., Помянкевич А. Н. и Нехотенова Е. И. Очищенный адсорбированный дифтерийный анатоксин, Журн. микр., эпид. ииммун., № 8, с. 54, 1951: Воробьев А. А., Васильев Н. Н. и Кравченко А. Т. Анатоксины, М., 1965, библиогр.; Выгодчиков Г. В. Микробиология и иммунология стафилококковых заболеваний, М., 1950, библиогр.; он же, Стафилококковые инфекции, М., 1963, библиогр.; Матвеев К. И. Ботулизм, М., 1959, библиогр.; он же, Эпидемиология и профилактика столбняка, М., 1960, библиогр.; Рамон Г. Сорок лет исследовательской работы, пер. с франц., М., 1962; Prévot A. R. Manuel de classification et de détermination des bacteries anaerobies, P., 1957.

1.1. Вакцины и анатоксины

Вакцины подразделяют на живые и убитые (инактивированные). Живые вакцины содержат ослабленные (аттенуированные) штам­мы микроорганизмов. Аттенуированные микробы являются наследст­венно изменёнными и характеризуются стойко сниженной вирулентно­стью (или её отсутствием) при сохранении иммуногенности.

Вакцинные штаммы получают разными способами:

а) путем пассажа возбудителя через организм невосприимчивого животного (фиксированный вирус бешенства);

б) путем культивирования микроорганизмов на неопти­мальных питательных средах или,в неоптимальных условиях (вакцина БЦЖ);

в) из внешней среды путем селекции вакцинных штаммов (фкцина СТИ);

г) путем выделения аттенуированных мутантов от боль­ных (вакцинный штамм краснухи Джерил Линн) и т.п.

Примеры живых вакцина чумная, БЦЖ, туляремийная, коревая, паротитная. Живые вакцины обычно вызывают формирование длительного иммунитета, в связи с чем их обычно вводят однократно и интервалы между вакцинации ми достаточно продолжительны. Однако использование таких вакцин может прдставлять опасность для лиц с иммунодефицитами.

Убитые (инактивированные) вакцины подразделяют на корпускулярные, химические, рекомбинантные, анатоксины и синтетические олигопептиды.

Корпускулярные вакцины содержат бактерии или вирусы, инактивированные тем или иным способом. Для приготовления вакцин используют штаммы микроорганизмов, обладающие наиболее полным набором антигенов (как правило, вирулентные). Инактивацию проводят физическими (нагревание, ультрафиолетовое излучение) или химическими (спирт, фенол, формалин) факторами.

Примеры корпускулярных вак­цин: антирабическая,коклюшная, лептоспирозная, гриппозная, клеще* вого энцефалита.

Химические вакцины содержат антигены, выделенные из опреде­ленных микроорганизмов химическим путём. Как правило, такие вакци­ны менее реактогенны по сравнению с живыми и корпускулярными. Та­кими вакцинами являются: вакцина брюшнотифозная, ВИ-полисахаридная, вакцина стафилококковая сухая для иммунотерапии, вакцина сыпнотифозная химическая и т.д. К химическим также относят­ся субъединичные (расщепленные) вирусные вакцины, например – грип­позная вакцина “Ваксигрипп”.

Рекомбинантные вакцины содержат антигены, полученные мето­дами генной инженерии. Примером такой вакцины является вакцина гепатита В рекомбинантная дрожжевая.

Анатоксины – это препараты бактериальных экзотоксинов, обез­вреженных действием тепла и формалина. Сущность метода заключа­ется в инкубации токсина в присутствии 0.35-0.4% формалина при тем­пературе 37-40° С в течение 20-40 дней. После такой обработки экзотоксины теряют токсичность, но сохраняют антигенность и иммуногенность. В процессе производства анатоксины подвергаются очистке от балласт­ных веществ и концентрации. Анатоксины индуцируют образование ак­тивного антитоксического иммунитета. После применения анатоксинов формируется стойкая иммунологическая память. В связи с этим повторное введение анатоксинов через 10 и более лет сопровождается выработкой антител в высоких титрах. Анатоксины используются для профилактики дифтерии, ботулизма и столбняка.

Синтетические олигопептидные вакцины представляют собой препараты будущего. Принцип их конструирования включает синтез пептидных последовательностей, образующих антигенные структуры, распознаваемые антителами.

Анатоксины и химические вакцины выпускают в виде адсорбиро­ванных препаратов. (Не путать с адсорбированнымми диагностическими сыворотками, которые получают адсорбцией оп­ределённых специфичностей антител по Кастеллани). В данном случае это означает, что антигены связаны с носителем (адсорбентам). В качестве сорбента используется гидроксид алюминия. Адсорбция повышает эффективность действия вакцин. Это обусловлено:

1) созданием «депо» антигена в месте введения, т. е. антиген постепенно отщепляется от сорбента и поступает в организм

2) адъювантным эффектом адсорбента. (усиление иммунного ответа)

Вакцины используются для профилактики инфекционных,заболе­ваний в плановом порядке и по эпидемиологическим показаниям, В ка­честв! лечебных вакцин можно отметить гонококковую и бруцеллезную.

ОФС.1.7.1.0004.15 Вакцины и анатоксины

Содержимое (Table of Contents)

ОФС.1.7.1.0004.15 Вакцины и анатоксины

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Взамен ГФ Х, ст. 59, 712

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на иммунобиологические лекарственные препараты (ИЛП) – вакцины и анатоксины, содержащие компоненты, вызывающие при введении человеку активный специфический иммунный ответ к антигенам микроорганизмов, включая микробные токсины. Активными компонентами могут являться:

  • живые микроорганизмы (авирулентные или аттенуированные);
  • микроорганизмы, инактивированные физическим или химическим способом;
  • антигены, выделяемые микроорганизмами или извлеченные из них, а также полученные по технологии синтеза или методами генной инженерии.

Антигены могут быть использованы в нативном состоянии или после детоксикации химическими и/или физическими методами. С целью повышения иммуногенности они могут быть агрегированы, полимеризованы или конъюгированы с носителем или адсорбированы на последнем.

Вакцины и анатоксины, наряду с одним или несколькими активными антигенными компонентами, могут содержать вспомогательные вещества. К вспомогательным компонентам относятся вещества органического или неорганического происхождения (адъюванты, консерванты, стабилизаторы и т.п.), вносимые в препараты для придания им определенных физико-химических и/или биологических свойств. Их наличие и количество должно быть отражено в нормативной документации производителя. В качестве вспомогательных веществ могут быть использованы только вещества, безопасность и эффективность которых при соответствующем пути введения установлена.

Вакцины выпускают в следующих лекарственных формах: растворы или суспензии (для инъекций или приема внутрь); лиофилизаты для приготовления растворов или суспензии для инъекций; таблетки.

Бактериальные вакцины содержат живые и/или инактивированные бактерии или их антигенные компоненты, количество которых в единице объема или в прививочной дозе определяют методом прямого подсчета или выражают в Международных Единицах мутности (МЕ).

Вирусные вакцины представляют собой инактивированные или живые вирусы или антигенные компоненты вирусов. Для получения инактивированных вирусных вакцин (цельновирионных, расщепленных, субъединичных) могут быть использованы как вирулентные, так и аттенуированные штаммы. Отсутствие нейровирулентности штамма должно быть продемонстрировано наиболее чувствительными методами. Активными компонентами вирусных вакцин могут служить рекомбинантные антигены, полученные методами генной инженерии, а также синтетические антигены, полученные методом химического синтеза.

Размножение вируса может быть осуществлено на куриных или перепелиных эмбрионах, а также с использованием линий диплоидных клеток, культур первичных и перевиваемых клеток животных или человека, клеток насекомых и других.

Содержание вирусных частиц в живых вакцинах выражают в ТЦД50 (тканевые цитопатогенные дозы), ООЕ (оспообразующие единицы), БОЕ50 (бляшкообразующие единицы), ЭИД50 (эмбрионинфицирующие дозы) и других единицах.

Для получения живых вакцин используют штаммы со стабильно закрепленными авирулентными свойствами.

Вакцины могут быть сорбированными, конъюгированными и несорбированными.

Анатоксины представляют собой полностью обезвреженные бактериальные экзотоксины, обладающие высокой иммуногенностью. Детоксикация токсинов, проводимая химическими и/или физическими методами, должна обеспечивать сохранение их антигенной активности и гарантировать отсутствие реверсии токсических свойств.

Анатоксины должны быть максимально очищены от балластных примесей методами, обеспечивающими сохранность их антигенных свойств. Для повышения иммуногенности анатоксины адсорбируют на адъювантах — как правило, на алюминия гидроксиде. Количество анатоксина в единице объема или в прививочной дозе выражают в единицах массы или установленных Международных единицах (флокулирующие единицы – Lf, единицы связывания – ЕС и др.). Специфическую (иммуногенную) активность анатоксинов в составе адсорбированных вакцин выражают в МЕ (международных единицах).

Жидкие лекарственные формы адсорбированных вакцин и анатоксинов не должны содержать неразбивающихся частиц.

Читайте также:  Булимия у детей это что такое: симптомы и последствия этого нарушения

ПРОИЗВОДСТВО

Общие требования

Все этапы производства вакцин и анатоксинов должны быть валидированы с целью подтверждения установленных требований, гарантирующих их качество и безопасность применения.

При производстве вакцин и анатоксинов используются рабочие посевные серии микроорганизмов, которые должны обладать теми же характеристиками, что и штамм, из которого получена исходная посевная серия. Штаммы микроорганизмов, используемые как исходная посевная серия, должны быть идентифицированы и охарактеризованы, включая информацию о происхождении.

Методы культивирования должны обеспечивать сохранение иммуногенных свойств вакцинных штаммов, безопасность препарата и предотвращать контаминацию посторонними вирусами, бактериями, грибами и микоплазмами.

Питательные среды для культивирования вакцинных штаммов не должны содержать ингредиентов, вызывающих токсические, аллергические или другие нежелательные реакции у людей. При необходимости использования таких ингредиентов следует продемонстрировать, что их количество в конечном продукте ниже уровня, гарантирующего безопасность для человека.

Животных, используемых при производстве и испытаниях, получают из хозяйств, благополучных в отношении бактериальных, вирусных, прионных и других заболеваний, опасных для человека.

При испытаниях на лабораторных животных следует учитывать положения Европейской Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей: испытания должны выполняться так, чтобы использовать минимальное количество животных и причинять им наименьшие боль, страдания и вред.

Культуры клеток

Культуры клеток, используемые для получения вакцин, должны быть аттестованы, депонированы в государственных коллекциях и разрешены к применению для вышеуказанных целей уполномоченным органом и соответствовать требованиям, изложенным в ОФС «Требования к клеточным культурам – субстратам производства иммунобиологических лекарственных препаратов».

При культивировании клеток не допускается использование нативной сыворотки крови человека, а также пенициллина и стрептомицина. При необходимости применения других антибиотиков их следует применять в минимально эффективной концентрации. В культуральных средах допустимо наличие индикатора рН, например, фенолового красного.

Куриные или перепелиные эмбрионы, используемые для производства, получают только от здоровой птицы из птицехозяйств, благополучных по инфекционной заболеваемости птиц; качество поставляемых эмбрионов подтверждается документами ветеринарной службы о санитарном состоянии поголовья. При инкубации эмбрионов, используемых при размножении вируса, не менее 2 % незараженных эмбрионов инкубируют параллельно с зараженными эмбрионами в качестве контроля на отсутствие контаминирующих вирусов.

При работе с культурами патогенных микробов и токсинами биологической природы следует соблюдать действующие санитарно-эпидемиологические правила.

Адсорбенты

Вакцины и анатоксины могут быть адсорбированы на алюминия гидроксиде, алюминия фосфате, кальция фосфате или других подходящих адсорбентах, безопасность и эффективность которых при соответствующем пути введения установлена.

В процессе производства адсорбированных вакцин и анатоксинов используют валидированный метод адсорбции антигена, обеспечивающий регламентированную полноту сорбции на протяжении всего срока годности ИЛП. Количество и сорбционная емкость адсорбента должны обеспечивать максимально возможную сорбцию антигена и ее стабильность.

Полноту сорбции определяют путем индикации антигена (антигенов) в надосадочной жидкости вакцин и анатоксинов, используя биологические, иммунологические и иммунохимические методы.

Консерванты

Антимикробные консерванты рекомендуется использовать при производстве адсорбированных лекарственных препаратов и препаратов, выпускаемых в многодозной расфасовке. Не рекомендуется использование консервантов при производстве лиофилизированных лекарственных препаратов и препаратов, выпускаемых в однодозовой расфасовке.

Показатели, которые существенно влияют на качество конечного продукта, но не могут быть выявлены, должны быть определены на промежуточных стадиях производства, о чем указывается в нормативной документации.

ИСПЫТАНИЯ

Описание

Приводят описание лекарственного препарата в соответствии с требованиями ОФС к используемой лекарственной форме.

рН

Нормативные требования указывают в нормативной документации. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия». Испытания жидких лекарственных форм проводят с неразведенным препаратом; лиофилизированных форм – с препаратом, растворенным в прилагаемом растворителе, а при его отсутствии – в растворителе, предусмотренном инструкцией по применению.

Потеря в массе при высушивании и определение воды

Потеря в массе при высушивании не более 3,0 % для лиофилизированных вакцин, если нет других указаний в нормативной документации. Для таблетированных лекарственных форм – не более 4,0 % при условии стабильного сохранения всех основных свойств на протяжении срока годности. В нормативной документации указывают метод определения для всех лекарственных форм.

Химические показатели

При необходимости указывают требования к количественному содержанию белка, нуклеиновых кислот, полисахаридов и др. и описывают метод их количественного определения (в случае, если они не подлежат включению в раздел «Специфическая активность»).

Стерильность

Инактивированные вакцины и анатоксины для инъекций должны быть стерильными. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Стерильность». Для живых бактериальных вакцин раздел «Стерильность» заменяют разделом «Отсутствие посторонних микроорганизмов». В нормативной документации указывают требования и методы определения. При необходимости проведения контроля на отсутствие микоплазм данный подраздел помещают после описания контроля на стерильность, не выделяя его в заголовке.

Микробиологическая чистота

Для неинъекционных лекарственных форм и живых вакцин указывают максимально допустимую контаминацию препарата и перечень видов микроорганизмов, наличие которых недопустимо. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

Пирогенность или бактериальные эндотоксины

Нормативные требования указывают в нормативной документации производителя. Определение проводят в соответствии с ОФС «Пирогенность» или ОФС «Бактериальные эндотоксины». Для препаратов, вводимых парентерально, которые не содержат в своем составе эндотоксины, указывают метод определения, пробоподготовку и тест-дозу препарата, допустимые условия определения (величина допустимых показателей температуры тела животных или содержание бактериальных эндотоксинов в соответствующих единицах).

Специфическая безопасность

Указывают нормативные требования и приводят описание методов in vivo и/или in vitro, позволяющих оценить полноту инактивации (для инактивированных вакцин), допустимую остаточную вирулентность микроорганизмов (для живых вакцин) или отсутствие экзотоксинов (для анатоксинов).

Аномальная токсичность

Приводят нормативные требования и описывают методы, позволяющие доказать отсутствие в препарате токсических веществ, с указанием вида животных, тест-дозы, способа введения препарата, времени наблюдения и критериев приемлемости результатов. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность».

Специфическая активность

Указывают требования к специфической активности и методы ее количественной оценки in vivo и/или in vitro (например, количественное содержание антигена, количественное содержание живых микроорганизмов в единице объема или прививочной дозе, антигенная активность, иммуногенные свойства и др.). Выбор применяемых методик определяется видом препарата. При исследованиях на животных указывают их вид, породу/линию, количество, массу тела, возраст, пол. Описывают пробоподготовку, дозы, схемы и методы введения испытуемых препаратов и стандартных образцов (в случае использования), методы оценки результатов и расчета, требования к результатам испытания. При использовании тест-штаммов приводят их наименование и название коллекции, тест-дозу и способ введения.

В случае, если предусмотрено применение эмбрионов птиц, приводят требования к их возрасту; при использовании культур клеток – их наименование.

Специфическая активность и реактогенность в наблюдении на людях

В случае, если предусмотрено проведение испытаний на ограниченной группе людей, раздел должен содержать сведения о периодичности проводимых исследований, характеристику контингента (пол, возраст, при необходимости – иммунологические показатели), дозу, схему и метод введения препарата, учитываемые показатели (клинические, серологические), методы оценки результатов и требования к результатам испытаний.

Полнота сорбции

Содержание неадсорбированных антигенов в надосадочной жидкости адсорбированных вакцин не должно превышать 1%, если в нет других указаний в нормативной документации. Приводят описание методики определения содержания неадсорбированных антигенов в надосадочной жидкости адсорбированных вакцин.

Производственные штаммы микроорганизмов и штаммы для контроля

Раздел должен содержать следующую информацию: наименование штаммов (на латинском языке в соответствии с международной номенклатурой) и место их депонирования; допустимое количество пассажей и условие их проведения (при необходимости) с указанием субстрата для культивирования; при необходимости – требования к характеристикам штаммов, дополнительные к их паспортным данным.

Консерванты

При использовании консервантов их концентрация не должна быть ниже минимально эффективной и не должна превышать значение, указанное на упаковке препарата, более чем на 15 % .

При использовании антимикробного консерванта – тиомерсала, определение проводят в соответствии с ОФС «Количественное определение тиомерсала в иммунобиологических лекарственных препаратах».

Свободный формальдегид

Не более 0,2 г/л. В препаратах для детей не более 0,1 г/л, если при приготовлении вакцин и анатоксинов использовался формальдегид. Определение проводят в соответствии с ОФС «Количественное определение формальдегида в иммунобиологических лекарственных препаратах».

Фенол

Не более 2,5 г/л, если при приготовлении вакцин и анатоксинов использовался фенол. Определение проводят в соответствии с ОФС «Количественное определение фенола спектрофотометрическим методом в иммунобиологических лекарственных препаратах».

В препаратах, содержащих дифтерийный и столбнячный анатоксины, а также коклюшную суспензию, присутствие фенола не допускается.

Алюминий

Не более 1,25 мг алюминия(III) на дозу, если при приготовлении использовался адсорбент, содержащий алюминий, и если в нормативной документации нет иных указаний. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение ионов алюминия в сорбированных иммунобиологических лекарственных препаратах».

Кальций

Не более 1,3 мг кальция(II) на дозу, при использовании адсорбента, содержащего кальций, если в нормативной документации нет иных указаний. Приводят описание методики определения.

Извлекаемый объем

Указывают нормативные требования. Определение проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения».

Растворители, выпускаемые в комплекте с препаратом

В качестве растворителей для лиофилизированных препаратов используют средства, разрешенные к медицинскому применению при соответствующем пути введения. Указывают вид растворителя и требования к его качеству.

Упаковка

В соответствии с ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты». Для выпуска препарата в многодозовой упаковке не рекомендуется использовать ампулы.

Транспортирование

В соответствии с ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты». В разделе указывают документ, регламентирующий условия и температуру транспортирования; при необходимости указывают продолжительность транспортирования при температуре, отличающейся от указанной в нормативной документации. Жидкие адсорбированные вакцины и анатоксины должны транспортироваться в условиях, исключающих замораживание.

Хранение

В соответствии с ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты». В разделе указывают регламентированные условия хранения, в первую очередь – температуру хранения, обеспечивающую сохранение активности препарата в течение заявленного срока годности. Если нет иных указаний, температура хранения должна находиться в пределах от 2 до 8 °С. Жидкие вакцины и анатоксины должны храниться в условиях, исключающих замораживание.

Ссылка на основную публикацию